甘油三酯（ TG） 含量檢測試劑盒說明書（可見分光光度法）

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

試劑內容：

試劑一：自備，取100 mL 玻璃空瓶，加入45mL 正庚烷，45mL 異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二： 液體 7mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三： 液體 30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四： 液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五： 液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑六： 液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存。

標準品： 粉劑×1 瓶，臨用前加 5mL 試劑一，即 1mg/mL 甘油三酯標準溶液，4℃保存。

產品說明：

TG 是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 

測定原理：

用異丙醇抽提取 TG，KOH皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，過碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質， 在 420 nm 有特征吸收峰，其顏色的深淺與 TG 含 量成正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿、雙蒸水和 100mL 玻璃空瓶。

操作步驟:

一、TG 的提?。?/span>

1 、 組織： 按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~ 10的比例（建議稱取約0. 1g組織，加入1mL 試劑一） 進行冰浴勻漿，8000g ，4℃離心10min ，取上清待測。

2 、 細胞、細菌： 先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內，棄上清，加 1mL 試劑一，超聲波破碎 1min（強度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g ， 4℃離心 10min ，取上清待測。

3 、 血清（漿） 等液體樣品： 直接測定。

二、測定操作：

1.    分光光度計預熱 30min ，調節波長到 420 nm ，蒸餾水調零。

2.    水浴鍋預熱到 65℃。

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩 30s ，靜置，待分層后取上層溶液 75μL ，置于新 的 EP 管中。

3.   甘油三酯含量測定：

取出 EP  管，待冷卻后，于 420nm  處比色，記為 A 空，A 標和 A 測。

注意： 空白管和標準管只需測定一次。

三、計算公式：

1、（漿） 中甘油三酯含量：

TG  含量（mg/dL）=C  標準品×（A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空） ×100

=100×（A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空）

C  標準品： 標準品濃度，1mg/mL；100：單位換算系數，1dL=100 mL。

2、組織中甘油三酯含量：

（1）按樣本蛋白濃度計算

TG  含量（mg/mg prot）= C標準品×V×（A 測－A 空） ÷（A 標－A 空） ÷（Cpr ×V）

=（A 測－A 空） ÷（A 標－A 空） ÷ Cpr

（2）按樣本鮮重計算

TG  含量（mg/g 鮮重） =C  標準品×V× （A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空） ÷W

=（A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空） ÷ W

C 標準品：1mg/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g ;V：加入試劑一的體積，1mL。

3、細胞、細菌中甘油三酯含量：

TG  含量（mg/104 cell）=C  標準品×（A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空） ÷細菌或細胞密度

 =（A 測－A 空） ÷ （A 標－A 空） ÷細菌或細胞密度

C  標準品： 標準品濃度，1mg/mL；細菌或細胞密度： 104 cell/mL

注意事項：

1、試劑盒中有易揮發性物質，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。

2、加試劑二后需劇烈震蕩，使待測液中甘油三酯得到充分提取。

3、最低檢出限為 100μ mol/L。